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荧光定量PCR技术服务

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荧光定量PCR技术服务技术支持客服

    荧光定量PCR 实时荧光定量PCR技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、?#34892;?#35299;决PCR污染问题、自动化程度高等特点,已成为国?#20351;?#35748;的核酸分子定量的标准方法,目前在基因表达研究和临床疾病检测等领域已得到广泛应用,南京钟鼎生物技术公司使用SYBRgreen法或者 Taqman 法对 DNA/RNA 进行 real time PCR 的定量测定或型的鉴定。

SYBR Green荧光染料法:适用于任何DNA,无需设计探针,采取双标准曲线法,实验周期短,结果重复性好,灵敏度高。
TaqMan荧光探针法:经验丰富的实验技术人员设计探针,对目标基因有高特异性,实验重复性好,相对于SYBR Green法,灵敏度更高。

服务特色:

服务优势

荧光定量PCR服务报价 

荧光定量PCR技术服务
服务项目 样品数量 服务报价(促销价) 服务?#24471;?/span>

RNA提取反转录

RNA专区操作,进口试剂,规范操作,确保?#20174;?#27169;板品质

10个样品以下 询价 样品量>100mg
10-20个样品 询价 样品量>100mg
20-30个样品 询价 样品量>100mg
30个样品以上 询价 样品量>100mg

基因检测

Light Cycler定量PCR仪器,圆形?#20174;?#28909;室,无边缘效应,灵敏度更高,三孔重复

1个基因/样品 询价 1-2周
2个基因/样品 询价 1-2周
3个基因/样品 询价 1-2周
超过3个基因/样品 询价 1-2周
1、需要进行绝度定量的实验,需提供或委托钟鼎生物构建标准品质粒,以标准质粒构建标准曲线(选5个浓度梯度,3次重复)。
2、使用SYBR-Green染料法进行实验时,引物费用60元/对,每个样品会依据样品来源配套特异性内参,三个复孔重复。
3、使用荧光探针法时,标记探针费用1200元/条,内?#25105;?#29289;探针免?#36873;?span class="STYLE6"> 样品数量较大时,请联系技术支持人员或销售人员,享受更大的折扣优惠


荧光定量PCR绝对定量PCR-标准曲线绘制:
    绝对定量是用已知浓度的标准品绘制标准曲线来推算未知样品的量。一般我们将待测的基因序列装入已知大小的质粒中作为标准品,将标准品稀释至梯度浓度,作为底物模板进行荧光定量PCR?#20174;Α?#20197;标准品拷贝数的对数值为横坐标,以测得的CT值为纵坐标,绘制标准曲线。当检测未知样品时,使用与标准质粒相同的?#20174;?#26465;件和相同的引物序列,扩增得出CT值,即可在标准曲线中计算出样品中目的基因拷贝数。

荧光定量PCR标准曲线绘制
服务项目 实验?#24471;?/td> 实验周期 实验报价
标准质粒构建 基因合成或PCR克隆法构建 1周 500元
标准曲线绘制 选择六个浓度梯度绘制标曲 1-2工作日 600元

荧光定量PCR扩增曲线溶解曲线

荧光定量PCR服务流程
1、根据基因序列设计特异性的引物或荧光探针
2、提取样品 DNA/ RNA、电泳、反转录
3、RealTime PCR(荧光定量PCR),进行扩增曲线、溶解曲线、表达量差异分析等实验
4、实验完成后,提供完整的实验报告(含软件分析结果)及引物等实验材料

荧光定量PCR样品要求
为了更好的为您服务,请提供尽量多的、新鲜的、保存完好的实验组织材料或模板材料,将待检测的目的基因序列或Genebank ID发送至[email protected],尽可能提供DNA/RNA来源、丰度等。

样品类型 细胞 组织 全血 血浆 RNA DNA
样品最少量 106 100mg 500ul 500ul 5ug 5ug
推荐保护剂 Trizol Trizol 肝素 柠檬酸 Rnase-Free水
运输条件 液氮/干冰 干冰 干冰 干冰 干冰 冰袋

荧光定量PCR实验实例:

1、RNA提取实验,钟鼎生物特色提取试剂盒,专区操作,提取的RNA质量更胜一筹。RNA的质量在荧光定量PCR检测实验中非常重要,虽然荧光定量PCR的产物较小,即使在RNA不完整或有?#21040;?#30340;状态下,其反转录的产物的扩增曲线依然可用,但为了让数据更加接近真实,我们仍然希望提供最新鲜的材料,使用最严谨的RNA提取方法获得高品质的RNA。

荧光定量RNA提取实验案例

2、荧光定量PCR?#20174;Γ?#38047;鼎生物采用的罗氏经典的lightCycler荧光定量PCR仪器,无边缘效应,能最大程度上?#20174;?#26679;品中的相对含量,下图为使用仪器自带软件导出的扩增曲线和溶解曲线图,通过图形即可初步判断扩增效率及扩增产物的特异性,我们会为每一个样品拟合扩增曲线及溶解曲线,提供最原始的分析数据。

荧光定量PCR扩增曲线溶解曲线

3、荧光定量PCR实验数据分析,每样品分三复孔平行检测,交付报告中直接分析原?#38469;?#25454;,计算相对表达量,并以客户指定的样品为标准进行相对定量数据分析。由于样品的特异性,RNA的完整性,引物扩增的效率等因素,荧光定量数据并非100%精确的?#20174;?#22522;因的绝对含量,其相对数据只能为基因表达量的判断提供参考。?#36865;猓?#38047;鼎生物?#32454;?#25353;照荧光定量PCR实验操作流?#25506;?#34892;实验,其数据为实验数据的真实?#20174;Γ?#25105;们不承诺分析得到的荧光定量相对定量数据与客户的理论预期100%一?#38534;?/p>

荧光定量PCR实验数据分析

荧光定量PCR实验数据分析

 

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